營養(yǎng)瓊脂 (Nutrient Agar)

用途：營養(yǎng)瓊脂用于細(xì)菌總數(shù)測定、保存菌種及純培養(yǎng)，也可用于消毒效果測定(GB/T4789.28-2003 中4.7 ,GB/T4789.2-2003，GB15979-2002和GB15981-1995，ISO標(biāo)準(zhǔn))。
原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、維生素、氨基酸和碳源;氯化鈉能維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。
使用方法：
1. 稱取營養(yǎng)瓊脂33g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15min，備用。
2. (食品)以無菌操作稱取檢樣25克(或25mL)，放入含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的玻璃三角瓶中(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)，充分振搖，即為1：10的均勻稀釋液。依次做1：100，1：1000……稀釋液。
3. 根據(jù)對樣品污染情況的估計(jì)，選擇2—3個合適的稀釋度，分別在做10倍稀釋的同時(shí)，吸取1mL稀釋液于滅菌平皿中，每個稀釋度做2個平皿。
4. 稀釋液移入平皿后應(yīng)及時(shí)將涼至46℃左右的培養(yǎng)基注入平皿約15mL，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻，同時(shí)將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1mL稀釋液的滅菌平皿內(nèi)作空白對照。待瓊脂凝固后，倒置于36±1℃溫箱中培養(yǎng)48±2h。
5. 觀察結(jié)果。
6. 菌落計(jì)數(shù)方法：做平板菌落計(jì)數(shù)時(shí)，可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡檢查，以防遺漏，在計(jì)下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。
7. 菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告：選取菌落數(shù)在30—300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標(biāo)準(zhǔn)。一個稀釋度使用兩個平板，應(yīng)采用兩個平板平均數(shù)，其中一個平板有較大片狀菌落生長時(shí)，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計(jì)算半個平板后乘以2以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有我鏈狀菌落生長時(shí)(菌落之間無明顯界線)，若僅有一條鏈，可視為一個菌落;如有不同來源的幾條鏈，則應(yīng)將每條鏈視為一個菌落計(jì)。
A：稀釋度的選擇：
應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30—300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(如下表)。若有兩個稀釋度.其生長的菌落數(shù)平均在30—300之間，則視兩者之比如何來決定。若其比值小于或等于2，則應(yīng)報(bào)告其平均數(shù);若大于2則報(bào)告其較小的數(shù)字(例2及3)。
若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300，則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(例4)。若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最底的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(例5)。
若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于1乘以最底稀釋倍數(shù)報(bào)告之(例6)。
若有稀釋度的平均菌菌落數(shù)均不在30—300之間，其中一部分大于300或小于30時(shí)，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(例7)。
B：菌落數(shù)的報(bào)告：
菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按其實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字，在二位數(shù)字后面的有效數(shù)值，以四舍五入法計(jì)算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可以用10的指數(shù)來表示。